Techniques de coloration en microbiologie
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1
Quelles sont les trois catégories de techniques de coloration ?
Coloration simple (1 colorant), coloration différentielle (plus d'un colorant), coloration spéciale
2
Quelles colorations différentielles sont citées dans ce cours ?
Gram, et les colorations pour bactéries acido-résistantes (Ziehl-Neelsen, Kinyoun, Auramine-Rhodamine)
3
À quoi servent les colorations spéciales ?
À identifier les structures facultatives des bactéries (capsules, spores, flagelles)
4
Quelle coloration spéciale met en évidence les capsules ?
- Coloration négative
- Vert de malachite
- Imprégnation à l'argent
- Ziehl-Neelsen
5
Quelle coloration spéciale met en évidence les spores ?
- Vert de malachite
- Coloration négative
- Imprégnation à l'argent
- Kinyoun
6
Quelle coloration spéciale met en évidence les flagelles ?
- Imprégnation à l'argent (Leifson)
- Vert de malachite
- Coloration négative
- Auramine-Rhodamine
7
Quel genre bactérien est acido-résistant et se colore mal au Gram ?
Mycobacterium
8
Pourquoi les mycobactéries se colorent-elles mal au Gram ?
Leur paroi contient une grande quantité de lipides
9
Quel acide gras de la paroi des mycobactéries est responsable de l'acido-résistance ?
L'acide mycolique
10
Qu'est-ce qu'une bactérie acido-résistante ?
Une bactérie qui résiste à la décoloration par les acides
11
Quels sont les matériaux de la coloration de Ziehl-Neelsen ?
Fuchsine de Ziehl, H2SO4 + éthanol 95° (décolorant), bleu de méthylène (contre-colorant)
12
Quel est le colorant primaire du Ziehl-Neelsen ?
La fuchsine de Ziehl (carbolfuchsine)
13
Quel est le décolorant du Ziehl-Neelsen ?
H2SO4 + éthanol 95° (solution acide-alcool)
14
Quel est le contre-colorant du Ziehl-Neelsen ?
Le bleu de méthylène
15
Combien de temps agit la fuchsine de Ziehl ?
2 minutes
16
Quel rôle joue la chaleur dans le Ziehl-Neelsen ?
Mordançage thermique : elle augmente la fluidité de la paroi pour que la fuchsine pénètre
17
Combien de fois passe-t-on la lame sous le bec Bunsen dans le Ziehl-Neelsen ?
3 fois
18
Jusqu'à quand chauffe-t-on le frottis dans le Ziehl-Neelsen ?
Jusqu'à formation de vapeur, sans faire bouillir ni sécher
19
Quelles sont les étapes du Ziehl-Neelsen dans l'ordre ?
Fuchsine + chaleur, rinçage, décoloration acide-alcool, rinçage, bleu de méthylène 2 min, rinçage, séchage
20
Jusqu'à quand décolore-t-on au Ziehl-Neelsen ?
Jusqu'à ce que la lame soit rose clair
21
Combien de temps agit le bleu de méthylène dans le Ziehl-Neelsen ?
2 minutes
22
Quelle couleur ont les bactéries acido-résistantes au Ziehl-Neelsen ?
- Rouge vif sur fond bleu clair
- Bleu sur fond rouge
- Violet sur fond rose
- Vert sur fond rouge
23
Quelle couleur ont les bactéries non acido-résistantes au Ziehl-Neelsen ?
Bleues (colorées par le bleu de méthylène)
24
Quelle est la différence entre Kinyoun et Ziehl-Neelsen ?
Le Kinyoun n'utilise pas la chaleur pour le mordançage
25
Quels sont les matériaux de la coloration de Kinyoun ?
Fuchsine de Kinyoun, HCl + éthanol 95°, bleu de méthylène
26
Quel est le décolorant du Kinyoun ?
HCl + éthanol 95°
27
Quelle coloration acido-résistante est utilisée comme dépistage car plus sensible ?
- Auramine-Rhodamine
- Ziehl-Neelsen
- Kinyoun
- Gram
28
Quels sont les matériaux de la coloration Auramine-Rhodamine ?
Solution d'auramine-rhodamine, HCl + éthanol 95° (décolorant), solution de KMnO4
29
Comment observe-t-on une coloration Auramine-Rhodamine ?
En microscopie à fluorescence, grossissement 200x à 400x
30
Quel aspect ont les bacilles à l'Auramine-Rhodamine ?
Fluorescents (jaune-vert) sur fond sombre
31
Qu'est-ce qu'une structure bactérienne facultative ?
Une structure parfois présente (plasmide, flagelles, capsule), contrairement aux structures toujours présentes
32
Quelles sont les structures bactériennes facultatives ?
Plasmide, flagelles, capsule
33
Quelles sont les structures bactériennes toujours présentes ?
Chromosome (ADN), ribosomes, paroi, membrane cellulaire, cytoplasme
34
À quoi sert la coloration négative ?
À identifier les capsules bactériennes
35
Quel est le principe de la coloration négative ?
Les pigments ne pénètrent pas la capsule, ce qui forme un halo non coloré
36
Quels colorants utilise-t-on pour la coloration négative ?
Encre de Chine (encre de l'Inde), nigrosine
37
Quel aspect a une capsule en coloration négative ?
Un halo blanc autour de la cellule, sur fond sombre
38
Pourquoi ne faut-il pas confondre coloration négative et microscopie à fond noir ?
La coloration négative est en lumière directe avec un fond coloré et un halo blanc autour de la capsule, alors que le fond noir utilise un éclairage particulier du microscope
39
Quelles bactéries sont capsulées d'après le cours ?
Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae
40
Quel champignon capsulé met-on en évidence par coloration négative ?
Cryptococcus neoformans
41
Quelle coloration utilise-t-on pour voir Cryptococcus neoformans dans le LCR ?
- Encre de Chine (coloration négative)
- Ziehl-Neelsen
- Gram
- Vert de malachite
42
Quel colorant colore les spores ?
Le vert de malachite
43
Quelle couleur ont les spores après coloration ?
Vert/turquoise
44
Quelle couleur ont les cellules végétatives dans la coloration des spores ?
Rouge (safranine)
45
Quel contre-colorant utilise-t-on dans la coloration des spores ?
La safranine
46
Comment observe-t-on une coloration de spores ?
En microscopie optique en lumière
47
Pourquoi faut-il une coloration spéciale pour les flagelles ?
Ils sont extrêmement minces et difficiles à voir en microscopie optique classique
48
Quel est le principe de la coloration des flagelles ?
Empiler des particules d'argent et du tanin sur les flagelles pour les épaissir
49
Quelle coloration met en évidence les flagelles ?
Imprégnation à l'argent (coloration de Leifson)
50
Quels types de ciliature bactérienne existent ?
Monotriche, lophotriche, péritriche, amphitriche
51
Que signifie monotriche ?
Un seul flagelle (ex : Vibrio cholerae)
52
Que signifie lophotriche ?
Un touffe de flagelles à un pôle (ex : Bartonella bacilliformis)
53
Que signifie péritriche ?
Flagelles répartis sur toute la surface (ex : Escherichia coli)
54
Que signifie amphitriche ?
Flagelles aux deux pôles (ex : Spirillum volutans)
55
Quel type de ciliature a Escherichia coli ?
- Péritriche
- Monotriche
- Lophotriche
- Amphitriche
56
Quel type de ciliature a Vibrio cholerae ?
- Monotriche
- Péritriche
- Lophotriche
- Amphitriche
57
Sur un frottis, bacilles rouges sur fond bleu après chauffage : quelle coloration et quel diagnostic évoquer ?
Ziehl-Neelsen, bacilles acido-alcoolo-résistants (Mycobacterium tuberculosis)
58
Sur une image, bacilles fluorescents jaune-vert sur fond noir : quelle coloration ?
Auramine-Rhodamine (microscopie à fluorescence)
59
Sur une image, cellules rondes avec halo blanc sur fond noirris : quelle coloration et que met-elle en évidence ?
Coloration négative (encre de Chine), mettant en évidence une capsule
60
Sur une image, bacilles avec corps ovoïdes verts : quelle coloration et que voit-on ?
Vert de malachite, des spores
61
Sur une image, bacilles entourés de fins filaments sombres : quelle coloration et que voit-on ?
Imprégnation à l'argent, des flagelles
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